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SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶  

2017-01-12 10:53:10|  分类: 生物化学试剂 |  标签: |举报 |字号 订阅

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SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记,在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好,结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。

包装:5块
  • 英文名:SuperSep Phos-tag
  • 别名:丙烯酰胺预制胶
SuperSep Phos-tag?丙烯酰胺预制胶
SuperSep Phos-tag即丙烯酰胺预制胶
SuperSep Phos-tag?丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记,在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好,结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。
Phos-tag?磷酸化亲和电泳原理
Phos-tag<sup>?</sup>磷酸化亲和电泳原理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品特点:
■ 即开即用 - 节约最宝贵的时间
■ 根据磷酸化程度分离磷酸化蛋白
■ 分离效果好,条带清晰
■ 无需磷酸化特异性抗体和放射性同位素标记
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶案例:
(1)分离磷酸化和去磷酸蛋白
分离磷酸化和脱磷酸蛋白
[电泳缓冲液]
Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

[电泳样品]
条带1: 未处理白蛋白
条带2: 去磷酸化白蛋白

[电泳条件] 20 mA, 70分钟
[染色] CBB快速染色
[脱色] 去离子水

白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化,采用的是碱性磷酸酶(日本基因公司,货号319-02661)。条带迁移证明去磷酸化完成。
(2)去磷酸化过程
去磷酸化过程
[电泳缓冲液]
Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

[电泳样品]
条带1: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 0 分钟)
条带2: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 15 分钟)
条带3: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 30 分钟)
条带4: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 45 分钟)
条带5: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 60 分钟)

[电泳条件] 35 mA, 60分钟
[染色] CBB快速染色
[脱色] 去离子水

β-酪蛋白按时间序列进行去磷酸化。结果证明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分离开了。同时验证去磷酸化程度与时间相关。
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品列表
1、适用于Bio-Rad电泳槽的预制胶
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
198-17981
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
195-17991
5 gels
2、适用于Life-technology电泳槽的预制胶
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
192-18001
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
199-18011
5 gels
3、适用于wako电泳槽的预制胶(>90 x 85 x 1 mm)
Product Name Well Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 6%
13 wells
192-17401
5 gels
17 wells
199-17391
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 7.5%
13 wells
195-17371
5 gels
17 wells
192-17381
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%
13 wells
193-16711
5 gels
17 wells
190-16721
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%
13 wells
195-16391
5 gels
17 wells
193-16571
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%
13 wells
193-16691
5 gels
17 wells
196-16701
5 gels
SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%
13 wells
197-16851
5 gels
17 wells
194-16861
5 gels
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶使用须知
样品制备:
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感,尤其是螯合剂,钒酸,无机盐,表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理:
另一个必须的步骤是在转膜前,用EDTA去除凝胶中的金属离子(Mn2+或者Zn2+); 该步骤可提高蛋白的转膜效率。
  1. 分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
  2. 将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,至少20分钟,温和摇晃。更换新缓冲液,重复3次。
  3. 将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,10分钟,温和摇晃。
  4. 转膜操作*。
* 建议用湿法转膜,以提高转膜效率。
转膜前处理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶质量控制
每一批SuperSep Phos-tag?,出厂前均据产品规格进行测试,以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白,且分离程度在正常参数内。
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上海西宝生物科技有限公司         021-60498804
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